一键完成的微RNA定量PCR引物设计
尽管微RNA芯片和微RNA测序检测方法已经普遍使用，但qRT-PCR的依旧是检验的微RNA表达定量的金标准。
由于微RNA的结构特殊，长度只有18-25个碱基，无法直接采用常规的PCR技术扩增，因此RT-qPCR的的引物设计对很多刚刚接触的微小RNA的同学都是一个难题。在针对微小RNA的PCR技术中，设计其引物的理念是基于延长待测微小RNA的长度，构建出一个足够长的PCR模板，才能进一步应用PCR技术来定量分析。
最常用的microRNA反转录PCR方法就是茎环法（茎环）和加尾法（poly-A tail）。由于茎环法反转录的引物设计原理限制，加尾法的检测通量比茎环法更高，因此加尾法也被实验室普遍使用。
今天小编就给大家介绍一个批量设计的微小RNA加尾法反转录PCR引物的软件miRprimer，的英文重点一键完成哦！
下载网站：https ://sourceforge.net/projects/miRprimer/
网站后台文件直接下载miRprimer地址：
https://jaist.dl.sourceforge.net/project/miRprimer/miRprimer2_installer.zip
miRprimer2_installer.zip，整个软件的压缩包只有2.68M（2848kb）大小。
提醒：
软件支持在Windows XP或更高系统中运行，还没在苹果电脑Mac OS系统测试（原因是小编的钱包羞涩~~）
2.经小编测试，最新版本，在不同的电脑中安装Ruby脚本环境。
第一步
miRprimer2_installer.zip压缩包2.68M大小，下载后解压缩生成同名文件夹，内有三个文件：input_miRs.txt，miRprimer2.exe，README.txt文件。
特别提示：不要更改这些文件的文件名。
第二步
input_miRs.txt，FASTA格式储存的是需要设计引物的微小RNA名字和序列。
可以按照模板形式输入待设计引物的微小RNA名字和序列：
> miR名
microRNA序列
第三步
这个时间
- 恭喜你，引物设计完成了！
小编推荐用MS Excel程序打开查看使用，方便编辑复制提交。
result_best_primer_pairs.txt文件包含了每个微小RNA最佳引物的评分，正向和反向引物的评分，以及引物二聚体形成的评分。这里只有评分最高的引物对，小编推荐优先采纳这个文件中给出的最佳引物对，将序列提交引物合成服务商。
如果上面提供的最佳引物实验效果不佳，或者溶解曲线不理想的话，其他四个文件就派上用场。
result_all_primer_pairs.txt文件包含了每个微小RNA的所有引物对评分和引物二聚体的评分信息。
result_f_primers.txt和result_r_primers.txt文件，包含了每个正向引物和反向引物的长度，评分，基于评分的排名和详细评分数;
result_comparison_of_pairs.txt文件，目的是便于人工检查所有正向和反向引物间两两之间序列相似度差异.Similarty to other pairs相似度越低，引物间差异越大;序列完全相同的引物，相似度是1。
如果软件提供的最佳引物对在反转录中工作不如意，不如试试那些相似度低的备选引物试试看。
那么问题来了，有朋友问小编：
人和其他模式动物
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植物
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微生物
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综述和方法学文献
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